經(jīng)過上期的介紹，相信大家對(duì)沙門氏菌已經(jīng)有了基本了解。

從本期開始，我們進(jìn)入選擇分離平板。

選擇分離是最考驗(yàn)檢驗(yàn)員的步驟，也是干擾菌最愛逞威風(fēng)的地方。

莫怕莫怕，陸橋助你斬妖除魔！

前方高能，海量照片來襲！

將培養(yǎng)后的TTB和SC搖勻，用接種環(huán)分別劃線接種于BS瓊脂平板和XLD瓊脂平板，或HE瓊脂平板，或沙門顯色平板，于36℃±1℃分別培養(yǎng)40h-48h或18h-24h，之后觀察各個(gè)平板上菌落特征。單菌落的菌落特征最為典型，利于觀察，為獲得大量單菌落，一般建議采用分區(qū)劃線。

? ? 菌落特征的觀察和選取對(duì)試驗(yàn)人員的經(jīng)驗(yàn)要求較高，為幫助各位試驗(yàn)人員更好的檢出沙門氏菌，我們將四種平板上常見菌落特征介紹如下：

BS瓊脂是沙門氏菌檢驗(yàn)中的必用平板，它的優(yōu)勢(shì)在于對(duì)傷寒沙門氏菌（S. Typhi）的檢出率比傳統(tǒng)平板高30-80%不等，特別是臨床檢驗(yàn)中。同時(shí)在沙門顯色培養(yǎng)基出現(xiàn)之前，對(duì)變形菌的抑制性和特異性均好于同類培養(yǎng)基。所以BS瓊脂一直是沙門氏菌選擇分離的首選培養(yǎng)基。

BS瓊脂的主要成分是亞硫酸鉍，但是成分表中也沒有此成分，這點(diǎn)與TTB類似。亞硫酸鉍由亞硫酸鈉和檸檬酸鉍銨在加熱過程中反應(yīng)生成，亞硫酸鉍和煌綠能互補(bǔ)的抑制大腸桿菌、變形桿菌和革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)，但是對(duì)傷寒、副傷寒等沙門氏菌的生長(zhǎng)沒有影響。具體可參考陸橋官網(wǎng)亞硫酸鉍瓊脂（BS瓊脂）。

培養(yǎng)基配制時(shí)不需要高壓滅菌，不宜過度加熱。建議當(dāng)天制備，第二天使用，超過48h會(huì)降低選擇性。

國(guó)標(biāo)上描寫的BS瓊脂上沙門氏菌菌落特征是：菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變。

其中前半段描寫的是典型沙門氏菌菌落形態(tài)，后半段是非典型沙門氏菌的菌落形態(tài)。下面我們會(huì)給大家展示一些實(shí)例，幫助大家在檢驗(yàn)中分辨沙門氏菌。

1.1.1?典型的沙門氏菌

菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色。

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1.1.3?非典型沙門氏菌形態(tài)的干擾菌

從上述菌落特征可以發(fā)現(xiàn)，傷寒沙門氏菌在BS瓊脂上是典型特征，利于提高檢出率。而常見干擾菌奇異變形桿菌為非典型菌落，大腸類菌受一定抑制，且特征屬于非典型。這都利于排除非沙門氏菌的干擾。但BS瓊脂也不是完美的，有些常見沙門氏菌也為非典型特征，需要我們挑取菌落時(shí)，優(yōu)先挑取典型菌落，兼顧非典型菌落。同時(shí)還需要其他培養(yǎng)基（XLD、HE或沙門顯色培養(yǎng)基）協(xié)同進(jìn)行檢驗(yàn)，避免漏檢。

XLD瓊脂的配方設(shè)計(jì)非常巧妙，目的是為了分離沙門氏菌和志賀氏菌。第一個(gè)巧妙之處是添加了木糖，腸道細(xì)菌幾乎都可以利用木糖，只有志賀不利用。所以志賀是無色的菌落。第二個(gè)巧妙是添加了賴氨酸，沙門氏菌也能利用木糖產(chǎn)酸，這樣就不能與其他腸道菌區(qū)分開，但是大部分沙門會(huì)產(chǎn)賴氨酸脫羧酶，在酸性條件下把賴氨酸脫羧后形成的尸胺是堿性，會(huì)中和木糖產(chǎn)的酸，從而使菌落保持無色。再配合硫化氫指示系統(tǒng)，沙門就變成了我們看到的形態(tài)。乳糖和蔗糖的存在可以讓產(chǎn)生賴氨酸脫羧酶的大腸菌群大量產(chǎn)酸，從而與沙門氏菌區(qū)分。具體原理可以參考陸橋官網(wǎng)木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂（XLD瓊脂）。

培養(yǎng)基配制時(shí)不需要高壓滅菌，不宜過度加熱。建議當(dāng)天制備，第二天使用。

國(guó)標(biāo)上描寫的XLD瓊脂上沙門氏菌菌落特征是：菌落呈粉紅色，帶或不帶黑色中心，有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心，或呈現(xiàn)全部黑色的菌落；有些菌株為黃色菌落，帶或不帶黑色中心。

前半段是典型沙門氏菌的菌落特征，包括了兩種主要的形態(tài)。后半段是非典型沙門氏菌的菌落特征。下面還是給大家展示一些實(shí)例，幫助大家在檢驗(yàn)中分辨沙門氏菌。

1.2.1?典型的沙門氏菌

1.2.2?典型沙門氏菌形態(tài)的干擾菌

1.2.3?非典型的沙門氏菌

1.2.4?非典型沙門氏菌形態(tài)的干擾菌

從上述菌落特征可以發(fā)現(xiàn)，傷寒沙門氏菌在XLD瓊脂上并不是最典型的，所以體現(xiàn)了BS瓊脂的重要性。腸炎沙門氏菌在XLD瓊脂上是最典型特征，彌補(bǔ)了BS瓊脂上漏檢的可能性。但是奇異變形桿菌和志賀氏菌的干擾也會(huì)很明顯。非典型的沙門氏菌菌落只有少數(shù)能發(fā)酵乳糖的亞利桑那菌才能形成，而日常檢驗(yàn)中看到的黃色菌落更多的是大腸類的菌。一旦看到黃色菌落，也只能挑取，通過生化試驗(yàn)進(jìn)行區(qū)分。

本期介紹了BS瓊脂和XLD瓊脂，下期除了HE瓊脂和沙門顯色外，還會(huì)帶來平板的匯總，敬請(qǐng)期待。。。。