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提高BAC，F(xiàn)osmid文庫(kù)拷貝數(shù)，您只差了一支誘導(dǎo)劑
首先安利一下Epicentre的專利技術(shù)——CopyControl?克隆系統(tǒng)，能夠讓您共享單拷貝和高拷貝的優(yōu)點(diǎn)。CopyControl?克?。菏紫纫詥慰截愋问缴L(zhǎng)，單拷貝可以確保插入穩(wěn)定及成功克隆編碼基因序列；在需要的時(shí)候，通過誘導(dǎo)液誘導(dǎo)成高拷貝克隆，以便下游應(yīng)用所需。這一系統(tǒng)可以用來構(gòu)建PCR克隆，對(duì)于BAC，F(xiàn)osmid文庫(kù)等大型質(zhì)粒格外有用。
CopyControl?克隆系統(tǒng)有兩個(gè)重要成分，相輔相成，缺一不可：
1．CopyControl? pCC1和pCC2載體
pCC1和pCC2載體含有兩個(gè)復(fù)制起始位點(diǎn)：?jiǎn)慰截惖拇竽c桿菌F-因子復(fù)制子和誘導(dǎo)型的高拷貝oriV。其中OriV的啟動(dòng)，需要trfA基因產(chǎn)物，由CopyControl?的另一個(gè)重要成分——TransforMax? EPI300 E.coli菌株提供。
圖1 pCC1載體圖譜
2．TransforMax? EPI300 E.coli
這是一種工程菌株，含有受誘導(dǎo)啟動(dòng)子控制的trfA基因，在誘導(dǎo)的條件下可以提供啟動(dòng)oriV所需要的trfA基因產(chǎn)物。
圖2 TransforMax? EPI300 E.coli菌株基因型
CopyControl?克隆誘導(dǎo)步驟
圖3 CopyControl?克隆流程
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